生物掃描電鏡主要是用于觀察和分析生物樣品的表面結構細節。其工作原理基于電子束與樣品相互作用產生的信號,主要用于獲取樣品表面三維形貌信息,拍攝照片為黑白照片。一般用來觀察細胞外表面的變形以及受損情況等,也可以觀察材料在細胞表面的分布情況。
1.送樣要求
(1)細胞樣品用1.5ml的尖底管,離心成團(至少黃豆大小),加入2.5%戊二醛固定液(緩慢加入電鏡固定液,不要將細胞吹散。若將細胞吹散,請離心3000轉,保持細胞成團狀)。固定液加滿離心管,使樣品完全浸沒在固定液中,放置于4°C固定12h后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸,注意:樣本管與冰袋隔開,固定液切勿冷凍結冰。 (細菌樣品要求同細胞)
(2)塊狀樣品:要求在不影響實驗目的的前提下,觀察面盡量平整,尺寸為厚 2~3mm、長寬 5~6mm。有正反觀察面要求的,制樣前要能夠視覺區分,不能區分要在形狀上做標記(可在樣本右上角裁剪掉一塊,右上角缺失面是正面(即觀察面),不能用記號筆標記)。放置于4°C固定12h后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸,注意:樣本管與冰袋隔開,固定液切勿冷凍結冰。
(3)打印填寫完整的實驗預約單和樣品一起寄送。
2.測試周期:一般為樣品接收后的2-3周左右,如遇法定假期需要順延,具體實驗周期及送樣時間請與e測試工作人員溝通確認,謝謝!
3.交付數據:每樣提供8張拍攝圖片(不提供分析服務)。如需更多照片請提前與工作人員溝通確認,并且會產生額外費用,請悉知!結果反饋請在測試完成一周內,不建議回收樣品,如有需要請提前反饋給e測試工作人員。
1、不導電或導電差的樣品,為什么要噴金?
SEM成像,是通過檢測器獲得二次電子和背散射電子的信號。如樣品不導電或導電性不好,會造成樣品表面多余電子或游離粒子的累積不能及時導走,一定程度后就反復出現充電放電現象(charging),最終影響電子信號的傳遞,造成圖像扭曲,變形、晃動等現象,噴金后樣品表面導電增強,從而避免積電現象。
2、2.5%戊二醛固定液如何配置?
市售25%戊二醛水溶液 10ml
0.1mol/L二甲砷酸鈉 50ml
蒸餾水加至 100ml
3、細胞原位觀察,怎么準備樣品?
可以用細胞爬片(可以區分正反面。不能用記號筆標記)培養細胞,培養后裝入5mL或者10mL離心管,后續加滿戊二醛固定液4℃固定12h,低溫保存寄送。
4、為什么有觀察面要求的樣本不能用記號筆標記?
因為制樣過程中會用到酒精脫水,記號筆標記會被洗掉;因此只能通過裁剪標記或者樣本形狀上能明顯區分正反面。